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edman降解为什么在碱性的环境

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fndb法和edman降解法原理相同吗 ...

生物化学为什么edman降解法能重复测氨基酸序列,而桑格法不行: 因为,edman降解试剂与多肽的游离的氨基作用,

fndb法和edman降解法原理相同吗:   fndb不知道是什么降解法,不能判断和edman降解法原理是否相同。
  下面是Edman降解原理:
  Edman降解(Edman degradation):是测定蛋白质一级结构的方法,主要是从蛋白质或多肽氨基末端进行分析。由埃德曼(P.Edman)在上世纪50年代所创立。分为耦合、切割、萃取、转化、鉴定等几个步骤。首先在pH9.0的碱性环境下,将异硫氰酸苯酯(Ph—N=C=S,PITC)和蛋白质或多肽N端氨基酸耦合,形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物;然后以三氟乙酸(TFA)处理耦合后产物,将多肽或蛋白的N一端第一个肽键选择性的切断,释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物;随后萃取出释放的氨基酸衍生物并在强酸性条件下转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH-氨基酸);最后以色谱法鉴定出降解下来的PTH-氨基酸种类,从而得到蛋白质或多肽N端序列信息。Edman降解法的优点是异硫氰酸苯酯与所有氨基酸残基的反应产率和回收率都相当高,因此反应副产物少,用色谱可以准确鉴定。而且对大多数氨基酸残基而言,30 min的耦合反应时间、5 min的切割反应时间都已足够。

edman法降解肽第一步反应为什么要控制在弱碱性条件下进行: 茚三酮反应:2,2-二羟基-1,3-茚三酮与氨基酸、肽类或蛋白质的自由α氨基或其他氨基化合物所产生的一种可定量的显色反应.所呈现的颜色随反应的条件(酸度、温度、盐浓度、铜、镉离子等)不同而异.用于氨基酸和肽的层析及定量测定.sanger反应:在弱碱性溶液中,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯作用,生成稳定的黄色2,4-二硝基苯氨基酸.可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸.edman反应:主要用于蛋白质或多肽氨基末端逐个进行测序.

环状寡肽一级结构的测定方法,是否可以用Edman降解法来测定呢?: 环状寡肽的一级结构也可以用 Edman 连续降解法来测定

edman降解为什么多肽反应速率快: 有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;羧基肽酶,肼解法;二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。

氨基酸(amino acid):含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。

测定蛋白质的构型和功能要用什么仪器,有哪些步骤:

你好,很高兴回答你的问题。

构型这个概念是指 一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。蛋白质的构型就是一级结构,指其氨基酸排列顺序。


测定蛋白质的构型的主要有两种方法:Edman降解(Edman degradation)和质谱法。


EDMAN降解法测序是经典的方法,通过从多肽链游离的N末端(或者C末端,但是很少)测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰,然后从多肽链上切下修饰的残基,现在一般都是自动测序仪


质谱法测蛋白只要是利用生物质谱仪,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特异的酶将蛋白切成肽段, 然后通过质谱方法进行测定,产生数据或通过重头比对,或者通过生物信息学中数据库搜索的方法推断出肽段序列,然后再由肽段序列拼接处蛋白序列。这种方法是近些年来随着蛋白质组学的发展而广泛被使用,但是对于蛋白完整序列测定需要较强的生物信息学技术。

整体而言, EDMAN降解法准确, 但是耗时长, 而且对于所测定的肽段要求很高, 不能太长, 不能太难修饰等等, 一般能测个20-50碱基不错了。而质谱法方法快速,但是准确性比EDMAN降解法略差。


另外,楼主讲的蛋白功能测定,不同的蛋白质功能各异,蛋白功能主要通过生物学实验反复验证次得到,这个比较复杂,没有固定的模式,要逐一研究。


另外,像核磁仪可以用来研究蛋白的构象或者说晶体结构,表面等离子共振仪器可以用来研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白质是未来有限的生物研究资源,现在全世界对蛋白质的研究热情都很高。也有许多相关的基础科教书,楼主感兴趣可以去看看。


纯手工打造,希望采纳哦。

edman降解法是不是PITC法: 是的。edman降解试剂苯异硫氰酸酯缩写就是PITC,edman降解法也叫PITC法。

Edman降解的限制::

由于Edman降解是以化学试剂对N-端氨基的修饰为基础的,因此当N-端被其他化学基团所封闭时,就需要先去除这些基团,然后才能进行测序。此外,蛋白质中含有半胱氨酸残基时,有时两个半胱氨酸残基会发生二硫键交联。这种情况下,需要先用过酸将二硫键氧化为–SO3H,然后才能用Edman降解测定序列。

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